🧪 GB 5009.35-2023 · 食品中合成着色剂的测定

高效液相色谱法（HPLC-DAD）— 外标法定量
📌 适用范围： 食品中 11种合成着色剂 的测定（柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红、喹啉黄、赤藓红）[reference:1]。
🎯 定量方式： 采用 外标法 定量[reference:2]。
📅 标准状态： 2023-09-06 发布，2024-03-06 实施[reference:3]。
📊 方法性能： 检出限 0.2~0.5 mg/kg，定量限 0.3~1.5 mg/kg[reference:4]。
📦 样品制备
取均匀试样 5~10 g（精确至 0.01 g）
固体试样需粉碎、混匀；液体试样直接取样
🧪 提取（乙醇氨水溶液）
加入 乙醇氨水溶液（700 mL无水乙醇 + 4 mL氨水，定容至1 L）[reference:5]
涡旋混匀，超声波提取 10~15 min
4000 r/min 离心 5 min，取上清液
📂 基质分类处理
液体类 直接取提取液过固相萃取柱[reference:6]
固体类 可先加 2~5 mL 水，50°C水浴超声溶解[reference:7]
含油量较大 加 20 mL 石油醚 涡旋超声除油[reference:8]
🧹 固相萃取净化（WAX柱）
WAX固相萃取柱 依次用 6 mL 甲醇 和 6 mL 水 活化[reference:9]
提取液以 1 滴/秒 过柱，弃去流出液
依次用 6 mL 2% 甲酸水 和 6 mL 甲醇 淋洗，弃去淋洗液[reference:10]
抽干小柱 5 min[reference:11]
💧 洗脱
用 2% 氨水甲醇溶液（2 mL氨水 + 甲醇定容至100 mL）[reference:12]
洗脱，收集洗脱液
🌡️ 浓缩与复溶
洗脱液于 40 °C 氮吹至近干
加入 1.0~2.0 mL 5% 甲醇水溶液 复溶[reference:13]
过 0.22 μm 滤膜
📊 HPLC-DAD 分析
色谱柱：C18柱（4.6×250 mm, 5 μm）[reference:14]
流动相：A：20 mmol/L 乙酸铵，B：甲醇[reference:15]
梯度洗脱，流速 1.0 mL/min[reference:16]
检测波长：415 nm（柠檬黄、喹啉黄）/ 520 nm（新红、苋菜红等）/ 610 nm（靛蓝、亮蓝）[reference:17]
定量方式：外标法
✅ 结果计算与报告
外标法定量，计算各着色剂含量（mg/kg）
扣除空白值，保留 三位有效数字
起始/制备
前处理/仪器分析
终点/结果
注意事项
📋 关键操作要点与质量控制 ▼
🧪 前处理要点
• 提取溶剂：乙醇氨水溶液（700 mL无水乙醇 + 4 mL氨水，定容至1 L）[reference:18]
• 固相萃取柱：WAX弱阴离子交换柱，使用前需用甲醇和水活化[reference:19]
• 含油量较大的试样需先用 石油醚 除油[reference:20]
• 氮吹温度控制在 40 °C 以下，防止目标物降解
📊 仪器分析要点
• 检测波长：415 nm（柠檬黄、喹啉黄）/ 520 nm（新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、赤藓红）/ 610 nm（靛蓝、亮蓝）[reference:21]
• 流动相：20 mmol/L 乙酸铵 + 甲醇，梯度洗脱[reference:22]
• 11种着色剂中，喹啉黄和亮蓝存在多个异构体，需注意色谱峰的归属
⚠️ 质量控制要求
• 须进行 空白试验、加标回收率试验、平行样测定
• 加标回收率应在 70% ~ 120% 之间[reference:24]
• WAX固相萃取柱不同批次间可能存在差异，使用前需进行 批次验收测试[reference:25]
📌 编制依据：
📖 GB 5009.35-2023《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》[reference:26]
📖 代替 GB 5009.35-2016、GB 5009.141-2016、GB/T 9695.6-2008、GB/T 21916-2008[reference:27]
📖 发布部门：国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局[reference:28]
📋 本标准适用于食品中11种合成着色剂（柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红、喹啉黄、赤藓红）的测定[reference:29]
⚠️ 检测结果以 mg/kg 表示，计算结果需扣除空白值，保留 3位有效数字