1. 试剂准备
亚铁氰化钾溶液 (106 g/L) — 10.6 g 亚铁氰化钾溶于水定容至 100 mL
乙酸锌溶液 (220 g/L) — 22.0 g 乙酸锌溶于水定容至 100 mL
对氨基苯磺酸溶液 (4 g/L) — 0.4 g 对氨基苯磺酸溶于水定容至 100 mL，避光保存
盐酸萘乙二胺溶液 (2 g/L) — 0.2 g 盐酸萘乙二胺溶于水定容至 100 mL，避光保存
亚硝酸钠标准使用液 (5.0 μg/mL) — 临用现配
饱和硼砂溶液 (50 g/L) — 5.0 g 硼砂溶于 100 mL 热水
2. 样品前处理
• 称取 5 g（精确至 0.01 g）均匀试样，置于 250 mL 锥形瓶中。
• 加入 12.5 mL 饱和硼砂溶液，摇匀。
• 加入约 150 mL 70 °C 热水，混匀，沸水浴加热 15 min。
• 冷却后定量转移至 200 mL 容量瓶中。
3. 沉淀蛋白质与脂肪
• 加入 5 mL 亚铁氰化钾溶液，摇匀。
• 加入 5 mL 乙酸锌溶液，摇匀。
• ⚠️ 顺序不可调换！ 放置 30 min。
4. 过滤
• 用定量滤纸过滤，弃去初滤液 30 mL，收集其余滤液备用。
5. 标准曲线制备
• 取 9 支 50 mL 比色管，分别加入亚硝酸钠标准使用液 0, 0.20, 0.40, 0.60, 0.80, 1.00, 1.50, 2.00, 2.50 mL。
• 各加纯水至 40 mL。
6. 显色反应
• 标准系列和样品管中各加入 2.0 mL 对氨基苯磺酸溶液，摇匀，避光静置 3~5 min。
• 加入 1.0 mL 盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，摇匀。
• 避光静置 15 min。
7. 比色测定
• 于 538 nm 波长处，用 1 cm 比色皿，以 试剂空白调零，测定吸光度。
8. 结果计算
• 以标准系列质量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
• 亚硝酸盐含量（mg/kg）= (m₁ × 1000) / (m × V₂ / V₁)
其中：m₁ — 由标准曲线查得测定用样液中亚硝酸钠质量（μg），m — 试样质量（g），
V₁ — 试样处理液总体积（200 mL），V₂ — 测定用样液体积（40 mL）。
⚠️ 安全提示： 对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二胺有刺激性；亚硝酸钠为有毒物质，操作时佩戴防护手套。